از هر یک از محلولهای استاندارد اوره ( طبق بند ب ) 5 میلی‏لیتر برداشته و در لوله‏های 25 میلی‏لیتری ریخته و به هر کدام 5 میلی‏لیتر محلول DMAB اضافه نمائید و یک محلول شاهد نیز حاوی 5 میلی‏لیتر محلول بافر 7 باضافه 5 میلی‏لیتر محلول DMAB تهیه نمائید

هدف از تدوین این استاندارد تعیین روشهای اندازه‏گیری اوره و ازت آمونیاکی در خوراک دام و طیور می‏باشد .

 

 2 ـ دامنه کاربرد

 

این استاندارد جهت اندازه‏گیری اوره و ازت آمونیاکی در خوراک دام و طیور کاربرد دارد .

 

 3 ـ نمونه‏برداری

 

طبق استانداردهای روش نمونه‏برداری در مواد غذائی عمل شود .

 

 4 ـ روش کار

 

 4-1- اندازه‏گیری اوره به طریق اسپکتروفتومتری

 

 4-1-1- وسایل مورد نیاز

 

ـ اسپکتروفتومتر با حداکثر باند 2/4 در طول موج 420^nm با سلهای یک سانتیمتری

 

 4-1-2- معرفها و مواد مورد نیاز :

 

 4-1-2-1- محلول پارادی متیل آمینوبنزالدئید ¹

 

 16 گرم پارادی متیل آمینو بنزالدئید را در یک لیتر الکل و 100 میلی‏لیتر اسید کلریدریک حل نمائید . این محلول برای یک ماده پایدار می‏ماند .

 

 4-1-2-2- اسید استیک

 

 4-1-2-3- محلول استات روی : 22 گرم استات روی 2H2O₂(,OAC)Zn را در آب حل کرده و 3 میلی‏لیتر اسید استیک بآن اضافه نمائید سپس آن را تا حجم 100 میلی‏لیتر رقیق نمائید .

 

 4-1-2-4- محلول فروسیانور پتاسیم : 10/6 گرم فروسیانور پتاسیم ₆ 3H2O(,CN) K₂Fe را در آب حل کرده و به حجم 100 میلی‏لیتر برسانید .

 

4-1-2-5- زغال اکتیو ـ (60 - G)

 

4-1-2-6- محلول بافر فسفات با 7 = PH

 

4-1-2-7- محلولهای استاندارد اوره :

 

الف : محلول استاندارد اولیه با غلظت 5ml/mg

 

5 گرم اوره را با دقت یک میلی‏گرم در آب حل کرده و سپس آن را تا حجم یک لیتر برسانید .

 

ب : محلولهای استاندارد مورد استفاده با غلظتهای 0/2 , 0/4 , 0/6 , 0/8 , 1 , 1/2 , 1/4 , 1/6 , 1/8 و 2 میلی‏گرم اوره در 5 میلی‏لیتر : به ترتیب 2,4,6,8,10,12,14,16,18,20 میلی‏لیتر از محلول اولیه (5ml/mg) را برداشته و در بالن ژوژه‏های 50 میلی‏لیتری ریخته و هر کدام را با محلول بافر فسفات 7 به حجم برسانید .

 

ج : محلول مرجع : محلول اوره استاندارد با غلظت 1/mg5ml را که بشرح فوق تهیه گردیده بعنوان استاندارد مرجع بکار ببرید . این محلول در حرارت کمتر از 24 درجه سلسیوس به مدت یک هفته ثابت می‏ماند .

 

4-1-3- رسم منحنی استاندارد اوره :

 

از هر یک از محلولهای استاندارد اوره ( طبق بند ب ) 5 میلی‏لیتر برداشته و در لوله‏های 25 میلی‏لیتری ریخته و به هر کدام 5 میلی‏لیتر محلول DMAB اضافه نمائید و یک محلول شاهد نیز حاوی 5 میلی‏لیتر محلول بافر 7 باضافه 5 میلی‏لیتر محلول DMAB تهیه نمائید . لوله‏ها را کاملا تکان داده و بگذارید 10 دقیقه در بن ماری 25 درجه سلسیوس بماند . سپس جذب هر یک از محلول‏ها را در طول موج 420^nm با استفاده از سلهای یک سانتیمتری در مقابل شاهد ( با جذب صفر ) بخوانید . آنگاه میزان جذب محلولها را در مقابل غلظت‏ها رسم نمائید . منحنی بدست آمده بایستی به صورت خط راست باشد در غیر این صورت آزمایش بایستی تکرار شده و محلول DMAB نیز تازه تهیه گردد .